注：文中未作特殊说明的“御坂妹妹”或“妹妹们”均指代检体番号00001-20000号“妹妹”。 “妹妹们（シスターズ）”又作“御坂妹妹”，泛指学园都市第三位的超能力者御坂美琴的体细胞克隆体的总称。但通常情况下仅指代检体番号在00001-20000号的克隆体，单价18万日元。
“御坂妹妹”的制造分为“量产型能力者计划”和“绝对能力者进化计划”两个阶段 。最初的 “妹妹们”有20002名，除检体番号1~20000号外，还有行踪不明、与“御坂网络”切断的0号和“妹妹们”的司令塔20001号的最后之作。其中，1-10031号共10031名“妹妹们”在 “绝对能力者进化计划”的实验中被一方通行杀死。检体番号10032-20000号的“妹妹们”由于上条当麻的干预实验终止得以存活。
在“第三次制造计划”还制造出番外个体，不在检体番号序列内。 以治疗肌肉萎缩为名，由幼年的御坂美琴提供DNA图谱发端，在“量产型能力者计划”中被制造出来。在使用了Zid-02、Riz-13、Hel-03等药物，十四天后就可以得到与超电磁炮相同的肉体。但是由于“妹妹们”的性能连其素体御坂美琴的百分之一都没有，因此“量产型能力者计划”被永久冻结。
此后转而作为“绝对能力者进化计划”的实验动物，在“量产型能力者计划”和“绝对能力进化实验”中有超过两万名“御坂妹妹”被制造出来。
在“绝对能力进化实验”中共有10031名“妹妹”惨遭一方通行的虐杀。在实验终止后，为了克服使用药物强行加速成长而造成寿命被缩短的结果（最多只有一两年的寿命），“妹妹们”被送到全世界各个学园都市的协力机构接受身体调整。实际上，“妹妹们”是作为统括理事长亚雷斯塔营造“人工天界”的媒介，假借“绝对能力进化实验”失败而被送到世界各地，从而构建覆盖全球的AIM网络，使原本只存在于学园都市内的虚数学区，扩张到全世界的范围，用以对抗魔法阵营。
为了方便“实验”，他们打扮得跟原型御坂美琴一样，即使在实验结束后，仍然保留了这一习惯 。在番外恶搞篇《とある暗部の下着论争》中，为了充分利用御坂妹妹们的性能，研究方尽量使所有的条件都接近于其本体御坂美琴，并再现本体的环境，其中包括发型、制服等都保持和本体一致。制服是经由“学舍之园”内部的工作人员偷来，但是却始终无法获得御坂美琴内衣裤的资料，研究员们并为此争辩不休。曾申请使用“树形图设计者”模拟出御坂美琴的生活，但遭到拒绝；派出的猎犬部队在常盘台中学宿舍也遭舍监全灭。最终由芳川桔梗购置了两万份的御坂妹妹内衣裤平息了这场争辩。在官方四格漫画中，为完全模拟本体御坂美琴的生活环境，三名中年研究员更是扮作白井黑子向参与实验的御坂妹妹们发嗲，结果御坂妹妹们果断以密集火力将其肃清。 运用复制人特有的同振幅脑波所形成的电磁情报网 。由于“妹妹们”拥有共同脑波波形，所有“妹妹们”的脑波转化成电子信号彼此连线，从而构筑成“御坂网络”。“妹妹们”共享一份记忆，巨大的网络作为同一个大脑来运作，就好比是一台类似“树形图设计者”的超高能并列演算机 。在“绝对能力者进化计划”中，“妹妹们”通过御坂网络不断共享牺牲的御坂妹妹的记忆，战斗力逐渐增强。
作为“御坂妹妹”中上位个体、“御坂网络”管理者的20001号（最后之作）拥有其他妹妹没有的感情和独立思考能力；而番外个体则作为“御坂网络”负面情感的集合体存在；00000号则没有连入“御坂网络”，目前情况不明。 因为以“学习装置”急速形成人格，“人类的感情处理方法”还不完全，更没成熟到正确的认识憎恨和恐惧之类的负面感情 。因此，“妹妹们”起初并没有感情，不惧怕死亡，也没有什么羞耻观念，内裤被看光光，甚至全裸被看到也面不改色。但是由于拥有学习能力，通过“御坂网络”的积累也会逐渐产生感情。在实验终止后，“御坂妹妹”的个体意识也会渐强，并有成长为个性的可能。性格上为“美琴的人格加上电波系大小姐的气质”。
由于曾被布束砥信注入感情程序，因而御坂19090号是“御坂妹妹”的一般个体中表情最丰富的个体。
不同于“御坂妹妹”的其他个体，最后之作和番外个体具有独立的意识和丰富的情感。 御坂00001-20000号全员自称“御坂”，在同其他御坂交流时则会同时报上检体番号“御坂XXXXX号”以示区别，在与最后之作交流时亦自称“御坂。”最后之作则自称“御坂御坂”，番外个体亦自称“御坂”。
称呼素体御坂美琴为“姐姐大人”，御坂10032号则被上条当麻称作“御坂妹”。 能力是“缺陷电气（Radio Noise）”。“Radio Noise”原意为无线电的杂音，因妹妹们的能力远逊于御坂美琴的“超电磁炮”，故如此称之 。其性能平均只达到了异能力者（Level 2）的程度，即使是最强个体也没有能超过强能力者（Level 3），“就算集结了两万人，实力也比不上超电磁炮”。由于无法目视电磁波，“妹妹们”经常佩戴将电磁波视觉化的军用护目镜。
亦能够放出以光速前进的雷击之枪，不同于美琴的蓝白色光电，妹妹们的是紫电，威力也只有理论上能够让人立刻昏迷的程度 。
最后之作达到Level 3，而作为“御坂妹妹”中最强战力的番外个体则达到Level 4。 受素体的基因影响，全员对“呱太”感兴趣，喜欢猫。即使是番外个体，作为“御坂网络”中的一员，在嗜好上也还是很接近小孩子的。